(1)仪器和试剂
仪器:高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、冰箱、生物显微镜、载波片、酒精灯、镍铬丝接种棒、培养皿(Ф00毫米)、试管(6×150毫米)、吸管(1、5、10毫升)、抽气瓶、漏斗、醋酸纤维素滤膜、小口采样瓶(1000毫升)等。
试剂:硫代硫酸钠、乳糖、胰蛋白陈、氯化钠、磷酸二氢钾、伊红水溶液、美蓝水溶液、琼脂、盐酸、氢氧化钠溶液等。
(2)水样采集供检测细菌的水样,必须按无菌操作要求采集、运送和保存。
自来水水样的采集:先将水龙头用酒精灯灭菌3分钟,然后将水龙头打开,放水5分钟,排除管内积存的死水,再用已灭菌的三角瓶接取水样,盖好瓶塞。如水中含有氯,则应按每采集500毫升水样加3%硫化硫酸钠溶液1毫升的量先加入采样瓶内,以清除水中余氯。
天然水体的水样采集:应在水面下10~15厘米深处取水,将已灭菌的带塞采样瓶,瓶口向下侵入水中,盛满水后,塞好瓶再从水中取出。
水样应立即送检,否则应冷藏保存,但不超过6小时。以防水样中细菌繁殖或死亡。
(3)培养基的制备检测细菌的培养基种类很多,除前面已述及的3种外,下面介绍另一种:
伊红美蓝培养基:在1升蒸馏水中加入乳糖10克、胰蛋白陈5克、氯化钠5克、磷酸氢二钾2克,调节pH为7.2,再加入2%的伊红水溶液20毫升和0.35%的美蓝水溶液20毫升,琼脂20克。待配好后装入适当容器,加上棉花塞,在5.88 × l04帕斯卡(0.6千克/厘米2)压力下高压蒸汽灭菌器中灭菌即成。
(营养琼脂培养基用于测定水样中的细菌总数;伊红美蓝培养基用于测定水样中的大肠菌群。营养琼脂培养基的制备见前面“空气中微生物的测定部分”的内容。)
(4)水样检验步骤
①细菌总数测定:a.用灭菌吸管吸取1 毫升水样注入培养皿,再倾入15毫升温度45℃的营养琼脂培养液,立即旋摇培养皿,使水样与培养基充分混和。b.待冷凝后,将培养皿置37℃温箱中培养24小时。最后进行菌落计数,所得结果即为1 毫升水样中的细菌总数。
②滤膜法测定大肠菌群:a.将漏斗、滤膜、抽滤瓶等置灭菌器中,在9.8牛顿/厘米2压力下灭菌20分钟。b.在一无菌培养皿中加入约15毫升伊红美蓝培养基,冷凝待用。c.将漏斗和抽滤瓶固定好,用无菌镊子夹取滤膜边缘,粗糙面向上,贴放在漏斗上。将1000毫升水样逐渐倒入漏斗中抽滤。d.滤完后,用镊子将附有细菌的滤膜取出,放在伊红美蓝培养皿上,使滤膜与培养基完全贴紧。e.将培养皿置于37℃温箱培养20小时后观察结果。培养基上呈紫黑色的菌落即为大肠菌群;因为大肠杆菌可发酵乳糖,使培养基中的伊红美蓝形成黑色化合物。其菌落数即为1 升水样中的大肠菌群数。我国规定1 升饮用水中大肠菌群数不得超过3个。对于污染水,每升水样中的大肠菌群是5~30万个时为轻污染;30~50万个时为重污染;大于50万个时为严重污染。
7-10 地面水常见有害物质的允许浓度
表7-11 生活饮用水水质标准(GB5749-35)
* 试行标准。
三、地面水质评价
限于青少年的年龄特点和学识水平,水环境调查科技活动,应以实地调查为主,在有条件时也可以做一些简易的取样分析。而对于评价水环境具有重要意义的汞、铬、砷、氰、酚等污染物的检测,在一般条件下是难以达到的,最好能求助于科研单位和环保部门。当取得了必要的资料时,就可以对区域水体进行水质评价了。表7-10和表7-11,分别列出了地面水中常见有害物质的最高允许浓度及生活用水的水质标准,可供评价时对比参考。
我国环保部门根据我国地表水质标准,污水排放标准,并参考国外一些资料,制定出我国水质资料的评价方法,并把地面水质分成5个等级。把自测和从环保部门得到的水质资料。列表统计,并将不同项目按表7-12的项目和标准评分,再将各项目的得分累加起来就可以得到各监测点的水质分级。其中第一级>95分;